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組胺是一種含氮的有機(jī)化合物,是由組氨酸在脫羧酶的作用下產(chǎn)生的。一般存在于皮膚、肺部和腸粘膜的肥大細(xì)胞中,當(dāng)發(fā)生炎癥的時(shí)候,就會(huì)釋放出組胺來了。組胺會(huì)讓血管舒張,增加毛細(xì)血管和微靜脈的管壁通透性,血漿進(jìn)入到組織中就會(huì)導(dǎo)致局部水腫。組胺的化學(xué)式為C5H9N3,分子量111.145,由咪唑環(huán)(含氮雜環(huán))與乙胺基團(tuán)通過兩個(gè)碳原子連接構(gòu)成。組胺易溶于水,可溶于乙醇,微溶于乙醚,氯仿等。在日光下容易變質(zhì),需避光保存。
檢測組胺含量的方法,實(shí)驗(yàn)室常用到高效液相色譜(HPLC)、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)、酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法、比色法等。以HPLC為例,簡單的介紹一下過程。技術(shù)參數(shù)比較粗略,如果要詳細(xì)的操作步驟和參數(shù),可咨詢或參考相關(guān)的文獻(xiàn)資料。
1.樣品前處理
使用0.4mol/L的高氯酸溶液提取樣品中的組胺,提取出來還要用10mg/mL的丹磺酰氯溶液進(jìn)行衍生化處理,便于后續(xù)的HPLC測定。衍生化處理,是為了提高檢測靈敏度。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;常用的流動(dòng)相為甲醇和乙酸銨,流速為1ml/min,紫外檢測器,波長254nm,進(jìn)樣量10-20uL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
用組胺的標(biāo)準(zhǔn)品配制出標(biāo)準(zhǔn)溶液母液,比如1mg/mL,梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn)并記錄下來。衍生化處理后,進(jìn)樣到HPLC測各個(gè)濃度的色譜峰。由于標(biāo)品是相對(duì)純的,測出來的色譜峰要符合要求,在前期方法開發(fā)的時(shí)候就要先調(diào)整好各個(gè)參數(shù),避免出現(xiàn)錯(cuò)誤或浪費(fèi)現(xiàn)象。對(duì)各個(gè)濃度點(diǎn)測出來的色譜峰,記錄它們的保留時(shí)間,并對(duì)它們的峰面積分別進(jìn)行積分處理,對(duì)應(yīng)它的濃度,在表格中可以擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品測定
樣品的測定過程是相似的,根據(jù)保留時(shí)間,找到色譜峰,并對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分,代入到回歸方程,計(jì)算出樣品溶液中的組胺含量。