山奈酚是一種黃酮類化合物，常見于茶葉、西蘭花、葡萄、蘋果、綠豆、桂皮、草莓、葡萄柚、南瓜、馬鈴薯、番茄等植物中。山奈酚具有多種生物活性，比如抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)代謝等。它是一種次生代謝產(chǎn)物，在醫(yī)藥、保健和日化等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。山奈酚化學(xué)式為C15H10O6，分子量286.2，微溶于水，溶于熱乙醇、乙醚或堿溶液。其核心結(jié)構(gòu)為黃酮母核（C6-C3-C6），官能團(tuán)包括羥基、醚鍵、碳碳雙鍵等，有兩個(gè)環(huán)。山奈酚在植物中通常以不同的糖苷形式存在，如紫云英苷（山奈酚-3-O-葡萄糖苷）。

常見的檢測(cè)方法：高效液相色譜（HPLC）、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）等。以HPLC為例，簡(jiǎn)單的介紹一下流程。

1.樣品前處理

精確稱取0.2g的樣本，這個(gè)樣本可能是植物的，如果是植物的話，就是要研磨成粉末的，這樣便于后期的提取。將樣本加入到15ml的離心管中，再加入5ml的80%甲醇水。你說為什么要用甲醇和水呢，因?yàn)樵诹鲃?dòng)相中一般也經(jīng)常會(huì)用到甲醇。為什么還要加水呢，之前我們說過，山奈酚是微溶于水的，如果完全不加水，有可能會(huì)損失一部分的含量。甲醇和水加入到離心管中和樣本粉末接觸，光浸泡是不行的，為了提高效率，放在振蕩器上充分的振蕩混合1min，室溫的條件下超聲30min。這個(gè)時(shí)候，樣本中的有機(jī)物基本上就溶出到溶液中了。于是，用4000r/min的離心10min。這個(gè)離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間，并不是隨意的設(shè)置的，這是根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，獲得的最優(yōu)化設(shè)計(jì)的方案。為了更準(zhǔn)確的獲得山奈酚，將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。剩下的殘?jiān)趺崔k，表面肯定還有一些，就按上述的操作再來一遍，這樣就提取的差不多了，將上清液合并到新的離心管中，氮吹到2ml混勻。用0.22um的膜過濾，待測(cè)。

2.色譜條件

C18的色譜柱是目前使用比較廣泛的，250mm長(zhǎng)，4.6mm的內(nèi)徑，5um粒徑。柱溫30℃，一般情況下的色譜柱溫在25-35℃，在實(shí)際環(huán)境和操作過程中是可以根據(jù)色譜出峰情況進(jìn)行調(diào)整的。如果溫度過高或過低，都會(huì)影響到峰的面積或基線，對(duì)結(jié)果會(huì)有比較大的偏差。流動(dòng)相這里采用的是0.1%磷酸水和甲醇，梯度洗脫的。具體多少時(shí)間，多少比例，是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來的，在方法開發(fā)的時(shí)候也會(huì)逐步調(diào)整。檢測(cè)器的話，有用UV的，也有用DAD的，波長(zhǎng)一般選擇280nm。流速設(shè)置為0.8-1ml/min，進(jìn)樣量10-20uL。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，就先配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確的稱取山奈酚標(biāo)準(zhǔn)品5mg，倒入到5ml的棕色的容量瓶中，加入適量的甲醇溶解，并用甲醇定容到刻度，搖勻后就成了1mg/ml的山奈酚標(biāo)準(zhǔn)溶液母液。一般在-20℃保存，如果要現(xiàn)配現(xiàn)用，就進(jìn)行梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn)，確保能夠覆蓋到樣品溶液的濃度，考慮定量限。依次進(jìn)樣到HPLC中，記錄出峰的保留時(shí)間，對(duì)各個(gè)峰面積進(jìn)行積分處理。在表格中，色譜峰面積對(duì)應(yīng)它的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，可擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。

4.樣品測(cè)定

有手動(dòng)進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣，一般都是自動(dòng)進(jìn)樣。根據(jù)HPLC的出峰情況，判斷是否需要調(diào)整。如果出峰是正常的，根據(jù)保留時(shí)間可以識(shí)別出目標(biāo)色譜峰，對(duì)峰面積進(jìn)行積分，并代入到回歸方程，可計(jì)算出樣品溶液中的山奈酚含量。