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芒果苷是一種黃酮類化合物,含有四羥基吡酮。芒果苷主要來源于植物芒果的果實(shí)、葉子、樹皮,或者知母的根莖和地上部分等。具有多種藥理作用,比如抗氧化,抗炎,免疫條件等,廣泛應(yīng)用在醫(yī)藥、化妝品、保健品等行業(yè)。芒果苷的化學(xué)式為C??H??O??,分子量為422.34,微溶于水,甲醇和乙醇,不溶于乙醚,正己烷等。它的核心結(jié)構(gòu)是1個(gè)四羥基黃酮骨架C2位和β-D-葡萄糖基通過碳-糖苷鍵連接而成。紫外光譜在240 nm和320 nm處呈現(xiàn)特征吸收峰。
檢測方法:高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)。這里以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測過程。
1.樣品前處理
樣品加入液氮研磨成粉末,稱重0.3g到15mL的離心管。加入5ml的甲醇,振蕩60s,室溫超聲30min,4000r/min離心10min。轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中,向殘?jiān)尤?ml甲醇,重復(fù)上述操作,合并定容10mL。上清液0.22um膜過濾,待測。
2.色譜條件
C18的色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑,柱溫25-30℃。以甲醇和水(90:10)為流動(dòng)相,等度洗脫。VWD檢測器,波長200nm。流速為1mL/min。進(jìn)樣量10-20uL,如有特殊情況,可嘗試30-40uL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
精密稱取10mg芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品于5mL棕色容量瓶中,然后加入適量甲醇超聲溶解后用甲醇定容至刻度線,搖勻、使之成為2mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液,-20℃保存。梯度成倍的稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),確保濃度范圍盡可能覆蓋到樣品的濃度,注意定量限的問題。依次進(jìn)樣到HPLC中,測出色譜峰圖。記錄峰的保留時(shí)間,對峰面積進(jìn)行積分處理,結(jié)合它的標(biāo)品濃度,在表格中擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品含量測定
進(jìn)樣到HPLC中,根據(jù)出峰的情況,觀察保留時(shí)間識(shí)別出目標(biāo)峰。對峰面積進(jìn)行積分處理,并代入到回歸方程,計(jì)算出樣品溶液中的芒果苷含量。