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蒼術(shù)素是一種重要的甾體化合物,主要來源于菊科植物茅蒼術(shù)或北蒼術(shù)的干燥根莖。分子式為C13H10O,分子量:182.2,可溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑。蒼術(shù)素具有降血糖、利尿、促進(jìn)胃排空、抗炎等生理活性。
檢測方法,包括高效液相色譜(HPLC),氣相色譜(GC)等。
1.HPLC
樣品處理:將樣本加入液氮,研磨成粉末的狀態(tài)。精確稱量大于0.3g放入到15ml的離心管中,加入5ml的甲醇,充分振蕩1min。在室溫的條件下,超聲30min。結(jié)束后,用4000r/min的離心機(jī)進(jìn)行離心10min。轉(zhuǎn)移上清液到新的離心管中,向殘?jiān)屑尤?ml的甲醇,重復(fù)一次合并上清并定容10mL。上清液0.22um膜過濾,待測。
色譜條件:C18的色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;柱溫25-30℃,VWD檢測器,波長200nm;以甲醇和水為流動相,等度洗脫。流速1ml/min,進(jìn)樣量20uL。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:精密稱取一定量各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品于5mL棕色容量瓶中,然后加入適量甲醇超聲溶解后用甲醇定容至刻度線,搖勻、使之成為2mg/mL的單標(biāo)儲備液,-20℃保存。梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),盡可能的覆蓋到樣本溶液的濃度范圍。依次進(jìn)樣到HPLC,測出色譜峰,記錄保留時(shí)間,對標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積進(jìn)行積分,在表格中擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
樣品測定:對樣品的測定方法,類似于標(biāo)準(zhǔn)品。進(jìn)樣到HPLC中,出現(xiàn)的峰不一定有標(biāo)準(zhǔn)峰那么漂亮。因?yàn)闃颖局谢衔锏姆N類和含量是不確定的,但要確保方法是科學(xué)的、準(zhǔn)確的、有效的。對測出來的色譜峰面積進(jìn)行積分,并代入到回歸方程,計(jì)算出樣品溶液中的蒼術(shù)素含量。
2.GC
采用氫火焰離子檢測器(FID),適當(dāng)?shù)拿?xì)管色譜柱,柱溫:150℃,進(jìn)樣器溫度:280℃,氮?dú)饬魉伲?0ml/min,氫氣流速:30ml/min,程序升溫。
對照品溶液的配制分別精密稱取蒼術(shù)素適量,加乙醚分別制成每毫升約含0.01mg的溶液,作為對照品溶液。梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),盡可能覆蓋到樣品溶液的濃度范圍。進(jìn)樣到氣相色譜,根據(jù)色譜峰面積和對應(yīng)濃度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
樣品溶液的制備精密稱取樣品粉末(過40目篩)100mg,置于10ml具塞試管中,加乙醚5.0ml,室溫超聲波提取10min,室溫靜置,上清液作為樣品溶液。
測定精密吸取樣品溶液及對照品溶液各2μl,進(jìn)樣測定出色譜圖。色譜峰面積,代入到回歸方程,得到樣品溶液中的蒼術(shù)素含量。