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三七皂苷R1主要來源于中藥材三七的干燥根莖,屬于達瑪烷型的四環(huán)三萜類皂苷化合物,分子結構相對復雜。在藥理學研究方法,具有保護心血管,抗氧化,抗炎,調節(jié)免疫,保護神經等作用?;瘜W式為C47H80O18,分子量933.13,溶解于甲醇、乙醇、DMSO和熱水,不溶于乙醚、氯仿和苯等。
檢測方法:高效液相色譜(HPLC),液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)等。
1.樣品處理
稱取樣品粉末(過四號篩)0.6g,并加入50mL甲醇到具塞容量瓶中。稱定重量,放置過夜,置80℃水浴上保持微沸2小時,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,0.22um膜過濾,待測。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mm長,4.6mm內徑,5um粒徑,柱溫25℃。紫外檢測器,波長203nm。進樣量10-20uL,流速1ml/min。以乙腈和水為流動相,梯度洗脫。
3.標準曲線
取三七皂苷R1的標準品適量,精密稱量,并加入70%甲醇溶解并稀釋成2.5mg/ml。梯度稀釋5-7個點,有的時候是成倍的,比如2倍或5倍,盡可能覆蓋到樣品溶液的范圍。最低點一般是定量限,通過信噪比的10倍可以得到。進樣到HPLC,測定出各個濃度點的色譜峰。記錄色譜峰的保留時間,并對標品的色譜峰面積進行積分處理。對應峰的標準溶液濃度,可擬合出標準曲線,得到回歸方程。
4.含量計算
將樣品溶液進樣到HPLC中,根據保留時間,找到三七皂苷R1的色譜峰。對這個色譜峰的面積進行積分處理,代入到回歸方程,可計算出樣品溶液中的三七皂苷R1含量。