環(huán)二鳥(niǎo)苷酸（c-di-GMP）是由鳥(niǎo)苷三磷酸在二鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的作用下環(huán)化而形成的，這個(gè)反應(yīng)的過(guò)程還需要有Mg2+作為輔助因子，以確保反應(yīng)酶的活性。c-di-GMP作為細(xì)菌中的第二信使分子，參與調(diào)節(jié)多種生理功能，比如細(xì)胞分化，生物被膜形成，致病因子產(chǎn)生等。它的作用機(jī)制是通過(guò)二鳥(niǎo)苷環(huán)化酶（DGC）合成和磷酸二酯酶（PDE）的降解途徑進(jìn)行調(diào)控的。c-di-GMP的化學(xué)式為C20H24N10O14P2，分子量為690.41。

檢測(cè)方法：高效液相色譜（HPLC）法，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS），酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法等。以HPLC為例，簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)流程。

1.樣品處理

根據(jù)樣品中種類(lèi)，如血清，血漿，細(xì)胞上清，組織勻漿等。采用不同的方法，去除雜質(zhì)，超聲，離心，膜過(guò)濾，待測(cè)。具體操作過(guò)程和方法，需參考相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)或開(kāi)發(fā)出來(lái)。

2.色譜條件

常規(guī)的C18反相色譜柱，250mmx4.6mm，5um，柱溫25℃；紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)253nm；以乙酸銨和乙酸銨甲醇為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速0.8-1ml/min，進(jìn)樣量10-20uL。僅供參考，需要重新驗(yàn)證或調(diào)整參數(shù)，獲得適合實(shí)際環(huán)境情況的最佳條件。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

將c-di-GMP的標(biāo)準(zhǔn)品用水進(jìn)行溶解和稀釋?zhuān)渲瞥蓸?biāo)準(zhǔn)母液，記錄它的濃度值。然后，梯度稀釋5-7個(gè)點(diǎn)，可以成倍的進(jìn)行，確保覆蓋到樣品溶液中的目標(biāo)化合物可能濃度范圍。最低點(diǎn)一般是在定量限，以信噪比（S/N）的10倍確定。依次進(jìn)樣到HPLC中，測(cè)出各個(gè)點(diǎn)的色譜峰，記錄它的保留時(shí)間。對(duì)各個(gè)峰的峰面積進(jìn)行積分處理，并結(jié)合它的濃度，擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。

4.含量計(jì)算

樣品溶液進(jìn)樣到HPLC中，在軟件中記錄色譜峰。由于樣品是復(fù)雜的，沒(méi)有標(biāo)品那么純正，因?yàn)榭赡軙?huì)出現(xiàn)雜峰。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間，找到樣品中目標(biāo)色譜峰的位置，并對(duì)它的峰面積進(jìn)行手工或自動(dòng)積分處理。將樣品的c-di-GMP的色譜峰面積代入到回歸方程，可計(jì)算出樣品溶液中的c-di-GMP的含量。