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輔酶Q10是能夠進(jìn)行有氧呼吸的真核生物中的一種輔酶,又稱(chēng)為泛醌。Q是醌基,10是尾部接上的異戊二烯的數(shù)量。它是一種苯醌類(lèi)的脂溶性化合物,在生物體內(nèi)的線(xiàn)粒體內(nèi)膜形成??梢酝ㄟ^(guò)食用堅(jiān)果,橘子,西蘭花等水果蔬菜獲得。輔酶Q10在人體中分布很廣泛,比如組織,血漿等,主要是參與線(xiàn)粒體的氧化磷酸化和ATP的產(chǎn)生,調(diào)控細(xì)胞氧化還原,加速細(xì)胞的更新?lián)Q代。從藥理機(jī)理來(lái)看,輔酶Q10具有抗機(jī)體衰老,抗疲勞,提高肌肉能量,調(diào)節(jié)免疫的作用。
分子式為C59H90O4,分子量為863.36,其結(jié)構(gòu)類(lèi)似于維生素K和維生素E,易溶于氯仿、苯、四氯化碳等有機(jī)溶劑,微溶于乙醇,不溶于水和甲醇。
檢測(cè)樣品中的輔酶Q10的含量,實(shí)驗(yàn)室的方法,主要是通過(guò)高效液相色譜(HPLC)來(lái)完成的。它包含了樣品前處理,色譜方法,色譜峰(標(biāo)品+樣品),標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),含量計(jì)算,方法學(xué)等過(guò)程。
1.樣品前處理:精密稱(chēng)量20mg樣品,加入大約40mL的無(wú)水乙醇,在50℃的水浴中溶解振蕩。溶解完成后,拿出來(lái)放冷,移到100mL的量瓶中,還是用無(wú)水乙醇定容到刻度,待測(cè)。
2.色譜條件:C18色譜柱,250mm長(zhǎng),4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑,35℃柱溫;以甲醇-無(wú)水乙醇為流動(dòng)相,等度洗脫,流速1ml/min;紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)275nm,進(jìn)樣量20ul,僅供參考。根據(jù)實(shí)際情況,需要驗(yàn)證或重新開(kāi)發(fā)方法。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):先用輔酶Q10的標(biāo)準(zhǔn)品,用無(wú)水乙醇溶解成0.2mg/mL的溶液。梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),記錄濃度值。進(jìn)樣到hplc測(cè)色譜峰,對(duì)測(cè)出來(lái)的色譜峰面積進(jìn)行積分處理。通過(guò)excel函數(shù),將峰面積和對(duì)應(yīng)濃度組合起來(lái),繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖,得到回歸方程,r2需要大于0.999,確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4.含量計(jì)算:前面的所有步驟,都是鋪墊。樣品的測(cè)定,才是正戲。將樣品進(jìn)行必要的稀釋?zhuān)M(jìn)樣到hplc中,用和標(biāo)準(zhǔn)品同樣的色譜條件,測(cè)出來(lái)輔酶Q10的色譜峰。其實(shí),每個(gè)物質(zhì)的出峰時(shí)間是相接近的,可以判斷出樣品的輔酶Q10的位置,對(duì)峰面積進(jìn)行積分。根據(jù)峰面積,和回歸方程,計(jì)算出樣品中的輔酶Q10含量。