檸檬酸合成酶，也稱為檸檬酸縮合酶。如果它要發(fā)揮作用，需要乙酰輔酶a和草酰乙酸作為底物。說來話長，這就要從三羧酸循環(huán)說起。檸檬酸合成酶催化乙酰輔酶a的乙基，和草酰乙酸的酮基結(jié)合，生成了檸檬酸輔酶a。這個(gè)時(shí)候，如果要得到檸檬酸，就要將檸檬酸輔酶a的輔酶a水解出來，生成檸檬酸進(jìn)入三羧酸循環(huán)。這個(gè)過程包括底物的氧化、脫羧、還原等反應(yīng)，受到ATP，NADH，琥珀酰輔酶a抑制。乙酰輔酶a和草酰乙酸是影響到檸檬酸合成速率。

檢測方法包括分光光度法，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法等。

1.分光光度法

檸檬酸合成酶（CS）催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A，進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸；該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。梯度稀釋，測定對(duì)應(yīng)的吸光度值，去除對(duì)照，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品的檸檬酸合成酶的活性，也就是作用能力。樣品的測定，為了確保更準(zhǔn)確，可以多3個(gè)平行。

2.酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法

采用的是雙抗體夾心法，測定樣品中的檸檬酸合成酶的含量。

用純化的植物檸檬酸合成酶（CS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物檸檬酸合成酶（CS），再與HRP標(biāo)記的檸檬酸合成酶（CS）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物檸檬酸合成酶（CS）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物檸檬酸合成酶（CS）活性濃度。