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在植物的細(xì)胞體內(nèi)是存在過(guò)氧化氫酶的,是能夠?qū)⑦^(guò)氧化氫催化分解為氧和水。過(guò)氧化氫酶是抗氧化酵素的一員,以鐵卟啉為輔基的結(jié)合酶。CAT的作用機(jī)制是將過(guò)氧化氫進(jìn)行歧化,必須有2個(gè)H2O2分子先后和CAT相遇,并碰撞在活性中心上,才能發(fā)生反應(yīng)。植物中主要存在于葉綠體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等部位。過(guò)氧化氫(H2O2)是細(xì)胞代謝中產(chǎn)生的代謝廢物,對(duì)細(xì)胞有毒害作用。CAT能夠消除體內(nèi)的過(guò)氧化氫,讓細(xì)胞免受H2O2的毒害。過(guò)氧化氫酶可以用于食品,紡織,美容等行業(yè)。
檢測(cè)方法:分光光度法,滴定法等。
1.分光光度法
過(guò)氧化氫(H2O2)在240nm的波長(zhǎng)處有紫外吸收特征,通過(guò)過(guò)氧化氫酶(CAT)催化H2O2分解,從而導(dǎo)致吸光度下降。通過(guò)對(duì)比過(guò)氧化氫前后吸光度的變化,可以計(jì)算出CAT的活性,即分解能力。
在這個(gè)過(guò)程中,實(shí)驗(yàn)條件對(duì)H2O2和CAT的作用影響比較大,對(duì)關(guān)鍵的步驟要注意操作。實(shí)驗(yàn)之前,要從植物中將過(guò)氧化氫酶給提取出來(lái)。通過(guò)加入緩沖液研磨,低溫離心,獲得上清液作為酶提取液。這個(gè)過(guò)程,既要能充分的將CAT提取出來(lái),而且自始至終要保持應(yīng)有的活性,也就是不能失活。
取一定的過(guò)氧化氫溶液,用磷酸緩沖液調(diào)整pH值到7.0,加入待測(cè)過(guò)氧化氫酶溶液,充分搖勻后,恒溫反應(yīng),每隔一段時(shí)間測(cè)一次吸光度值,扣除空白對(duì)照。吸光度隨時(shí)間的下降速率,進(jìn)而確定 CAT 活性。
2.滴定法
滴定法是通過(guò)滴定反應(yīng)中未分解的 H?O? 來(lái)確定 CAT 活性。此方法中通常使用高錳酸鉀(KMnO?)溶液進(jìn)行滴定。高錳酸鉀可以氧化殘留的 H?O?,滴定過(guò)程中 KMnO? 的消耗量可以反映 CAT 的活性。操作步驟可以參考相關(guān)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn),高錳酸鉀滴定法。