大黃素主要來源于蓼科植物，特別是虎杖的干燥根莖和根，掌葉大黃的根莖中。化學(xué)式為C15H10O5，分子量270.24，具有蒽醌的特殊反應(yīng)，幾乎不溶于水，溶于乙醇及堿溶液。大黃素的結(jié)構(gòu)是1，6，8-三羥基-3-甲基蒽醌，分子結(jié)構(gòu)中具有多個(gè)雙鍵和環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在質(zhì)譜分析的過程中需要掌握它的基本特點(diǎn)。另外，大黃素是一種類胡蘿卜素，在植物中的作用主要是將光能吸收過來，轉(zhuǎn)化為可利用的化學(xué)能，促進(jìn)光合作用的進(jìn)行。能夠抗氧化，抗炎，調(diào)節(jié)免疫，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有重要的作用。

檢測方法：高效液相色譜（HPLC）法、分光光度法、薄層色譜法、電化學(xué)法等。

1.高效液相色譜法

樣品采用甲醇回流方法提取，鹽酸超聲處理，三氯甲烷回流萃取，定容待測。

色譜條件，采用C18色譜柱，柱溫為室溫或特定溫度；甲醇和水為流動相，也可以用甲醇-0.1%磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min；紫外檢測器，波長可設(shè)置254nm，進(jìn)樣量為10-20ul。色譜條件是隨著具體實(shí)驗(yàn)的情況而定，將參數(shù)調(diào)整到相對理想的狀態(tài)，獲得有效的色譜峰。

標(biāo)準(zhǔn)曲線，一般為了更準(zhǔn)確的測出大黃素的含量，采用外標(biāo)法，即標(biāo)準(zhǔn)曲線的形式，計(jì)算它的含量。其實(shí)，就是將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解，并成倍的，梯度稀釋，至少6個(gè)點(diǎn)的濃度。這個(gè)濃度范圍，要覆蓋到檢測器的有效的檢測限內(nèi)，從而獲得相對準(zhǔn)確的檢測信號。根據(jù)測出來的色譜峰，和對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，可以繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。同時(shí)，相關(guān)系數(shù)r2＞0.999，重復(fù)性要符合要求。如果做方法學(xué)驗(yàn)證，需要考慮回收率。

樣品測定：在測定樣品色譜峰的時(shí)候，可能要對出峰情況進(jìn)行注意。采用標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜條件測定，根據(jù)色譜峰面積，和標(biāo)準(zhǔn)曲線的關(guān)系，可以計(jì)算出大黃素的含量。

2、分光光度法

利用大黃素在特定波長下的吸光度來測定其含量。需要大黃素在顯色時(shí)與某種試劑反應(yīng)，生成有顏色的化合物，該化合物的顏色深淺與大黃素的濃度成正比。在特定波長，比如340nm的地方測定吸光度值。同樣，要采用標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，計(jì)算出樣品中大黃素的含量。

這種方法比較簡單，操作方便，成本也很低。但是，在測的過程中，容易受多種因素的干擾，顯色不穩(wěn)定，導(dǎo)致數(shù)據(jù)飄忽不定，可能不夠準(zhǔn)確。

3.薄層色譜法

利用不同化合物在薄層板上的移動速度不同，將大黃素與其他化合物分離開來，然后通過測定大黃素的斑點(diǎn)面積或顏色深淺來計(jì)算其含量。將大黃素樣品提取并點(diǎn)在薄層板上。用適當(dāng)?shù)恼归_劑將樣品展開，使大黃素與其他化合物分離開來。測定大黃素斑點(diǎn)的面積或顏色深淺，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量。如果分離效果不夠理想，測定結(jié)果容易受到其他化合物的影響。