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丹酚酸B是一種有機(jī)化合物,由唇形科植物丹參的根及根莖提取而成的酚酸類(lèi)化合物。分子式為C36H30O16,分子量為718.62,可溶于水和甲醇,乙醇,不溶于醚。化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有三個(gè)羥基和一個(gè)苯環(huán),具有明顯的酸性。具有多種藥理作用,比如抗氧化,清除自由基,抗炎抗菌等作用。
檢測(cè)丹酚酸B含量的方法,其實(shí)在藥典中已有明確的規(guī)定,使用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定含量。
樣品前處理:精密稱(chēng)量0.2g樣品,放在50ml量瓶中,加入適量的甲醇,超聲處理20min,放冷后加水到刻度,搖勻過(guò)濾。精密吸取1ml,放在25ml的容量瓶中,加水到刻度,搖勻待測(cè)。
色譜條件:C18色譜柱,柱溫為室溫。甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59)為流動(dòng)相,流速為1.0-1.2ml/min。紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)為286nm。進(jìn)樣量為20ul,僅供參考。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:精密稱(chēng)取丹酚酸B的標(biāo)準(zhǔn)品,加水制成10ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度。了解檢測(cè)器的波長(zhǎng)范圍,得到最佳的檢測(cè)濃度范圍。成倍的,梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液,至少6個(gè)點(diǎn)。以上述的色譜條件,進(jìn)樣到HPLC中,測(cè)定對(duì)應(yīng)的色譜峰。一般都會(huì)在進(jìn)樣序列中對(duì)色譜峰有編號(hào),根據(jù)測(cè)出的色譜峰面積,對(duì)它進(jìn)行積分處理。以色譜峰面積為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
樣品測(cè)定:前處理好的樣品,可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的色譜條件,進(jìn)樣到HPLC中,測(cè)定對(duì)應(yīng)的色譜峰。這個(gè)過(guò)程看起來(lái)比較容易,其實(shí)操作的過(guò)程中,可能會(huì)出現(xiàn)多種問(wèn)題。比如色譜出峰不規(guī)則等情況,和樣品的性質(zhì)有關(guān),也和進(jìn)樣過(guò)程的操作有關(guān)。有時(shí)候,樣品濃度過(guò)高,還需要進(jìn)行必要的稀釋?zhuān)涗浵♂尡稊?shù),便于后期的含量計(jì)算。
結(jié)果計(jì)算:對(duì)結(jié)果的計(jì)算,是基于標(biāo)準(zhǔn)曲線的。根據(jù)樣品的色譜峰面積,和回歸方程,可以計(jì)算出樣品的含量。有時(shí)候,還要考慮回收率,稀釋倍數(shù)等因素。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線,也是有要求的。如果擬合的不好,測(cè)出來(lái)的結(jié)果就差別很大了。標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r2要大于0.999,接近于直線。重復(fù)性要在規(guī)定的范圍內(nèi),降低偶然性誤差。