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HPLC測(cè)定半胱氨酸含量
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2025-07-08 | 13 次瀏覽 | 分享到:
半胱氨酸屬于非必需氨基酸,是脂肪族含巰基的極性α-氨基酸,人體的條件必需氨基酸和生糖氨基酸。半胱氨酸可由體內(nèi)的蛋氨酸(甲硫氨酸,人體必需氨基酸)轉(zhuǎn)化而來(lái),它是不穩(wěn)定的化合物,容易氧化還原,與胱氨酸相互轉(zhuǎn)換。半胱氨酸是谷胱甘肽的組成之一,它能加速自由基的老化。它的主要作用包括抗氧化和解毒,蛋白質(zhì)合成和組織修復(fù),免疫調(diào)節(jié)和代謝輔助等。主要用于醫(yī)藥、化妝品、生化研究等方面。

半胱氨酸屬于非必需氨基酸,是脂肪族含巰基的極性α-氨基酸,人體的條件必需氨基酸和生糖氨基酸。半胱氨酸可由體內(nèi)的蛋氨酸(甲硫氨酸,人體必需氨基酸)轉(zhuǎn)化而來(lái),它是不穩(wěn)定的化合物,容易氧化還原,與胱氨酸相互轉(zhuǎn)換。半胱氨酸是谷胱甘肽的組成之一,它能加速自由基的老化。它的主要作用包括抗氧化和解毒,蛋白質(zhì)合成和組織修復(fù),免疫調(diào)節(jié)和代謝輔助等。主要用于醫(yī)藥、化妝品、生化研究等方面。


檢測(cè)方法:高效液相色譜(HPLC),一般有前處理、色譜條件、標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣品含量測(cè)定等過(guò)程。


1.樣品提?。ㄋ?衍生)


稱(chēng)取0.2g樣品,放到15ml的離心管中,加入2ml的6mol/L的鹽酸,振蕩混勻5min。放到105℃的烘箱水解24h。用6mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)到中性,用水定容到5mL。振蕩5min,4000r/min離心10min,取上清0.5ml衍生。


將0.5ml的上清液,放到15ml的棕色離心管中。依次加入pH=9.0的碳酸氫鈉緩沖液和DNFB各0.5ml,放入到60±0.5℃水浴中,避光反應(yīng)60min。取出立即用冷水冷卻至室溫,加入3.5ml pH=7.0磷酸緩沖溶液,充分混勻,室溫避光反應(yīng)15min,取上清液過(guò)0.22μm 濾膜,待液相色譜測(cè)定。


2.色譜條件


C18色譜柱:250*4.6mm; 5μm,柱溫38℃。A:乙腈:甲醇=90:10   B:0.02mol/L磷酸二氫鈉+磷酸氫二鈉 為流動(dòng)相,梯度洗脫,流速1ml/min。DAD檢測(cè)器,波長(zhǎng)360nm,進(jìn)樣量10-20uL。


3.標(biāo)準(zhǔn)曲線


配制半胱氨酸的標(biāo)準(zhǔn)母液,并梯度稀釋至1mg/L,5mg/L,10mg/L,20mg/L,50mg/L,100mg/L。依次進(jìn)樣到HPLC,測(cè)出各個(gè)濃度的色譜圖。對(duì)色譜峰的面積進(jìn)行積分,擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。


4.含量測(cè)定


將衍生后的樣品進(jìn)樣到HPLC中,根據(jù)標(biāo)品的保留時(shí)間,可找到目標(biāo)的色譜峰。對(duì)半胱氨酸的色譜峰面積進(jìn)行積分,并代入到回歸方程,可計(jì)算出樣品溶液中的半胱氨酸含量。


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