維生素K1是一種脂溶性的維生素，多環(huán)芳香酮。維生素K1主要是從天然的綠色植物中提取出來的，比如菠菜、羽衣甘藍(lán)等。它不溶于水，但可溶于氯仿、乙醚、植物油、乙醇等有機(jī)溶劑，對光敏感，最佳儲存溫度為2-8℃。維生素K1主要用在科學(xué)研究或工業(yè)方面，藥理方面主要涉及血液凝固和骨骼健康等。

檢測樣本中維生素K1含量的方法，主要有高效液相色譜（HPLC）、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）等。以HPLC為例，簡單的介紹一下檢測流程。具體的要參考相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)、藥典或文獻(xiàn)資料。

1.樣品提取

皂化：精確稱取樣品 2g置于5m棕色離心管內(nèi)，加入2mL乙醇，勻漿 。轉(zhuǎn)移到50mL棕色離心管，再加入抗壞血酸1g、BHT0.1g、加入 8mL乙醇，50%氫氧化鉀 20mL，然后充分振蕩混勻1min。置于85℃水浴中避光皂化30min。反應(yīng)結(jié)束后，取出用冷水冷卻至室溫。                

萃?。涸谏鲜鲈砘玫姆磻?yīng)液中加入15mL石油醚，充分混合振蕩1min，靜置15min。將石油醚層轉(zhuǎn)移另一個50mL棕色離心管內(nèi)。重復(fù)萃取兩次。然后合并三次萃取液。用水洗滌至中性，加入1g無水硫酸鈉，取上清液，室溫氮氣吹干。加入0.5mL色譜級乙醇復(fù)溶，過0.22μm濾膜,立刻上機(jī)測定。

2.色譜條件

C18的色譜柱，250mm長，5.6mm內(nèi)徑，5um粒徑，柱溫30℃。流動相可以用100%甲醇，等度洗脫，流速設(shè)置為1ml/min。VWD或紫外檢測器，波長254nm。進(jìn)樣量10-20uL，僅供參考，以實際情況進(jìn)行調(diào)整。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取一定量各個標(biāo)準(zhǔn)品于5mL棕色容量瓶中，然后加入適量甲醇超聲溶解后用甲醇定容至刻度線，搖勻、使之成為1mg/mL的單標(biāo)儲備液，-20℃保存。梯度稀釋6個濃度點，成倍的稀釋，比如2倍或5倍等，盡可能的覆蓋到樣本溶液的濃度范圍。這里需要考慮到檢測限或定量限，以信噪比的倍數(shù)作為參考。記錄6個濃度的數(shù)值，并依次進(jìn)樣到HPLC中，判斷出峰的情況。記錄色譜峰的保留時間，對峰面積進(jìn)行積分處理。根據(jù)對應(yīng)的濃度值，擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。

4.含量計算

將樣本溶液進(jìn)樣到HPLC中，出峰的情況可能比標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)雜一些。樣本溶液中的物質(zhì)以及它們的性質(zhì)是不確定的，有時候用過的色譜柱，也會出現(xiàn)污染或堵塞等情況。根據(jù)保留時間，可以找到樣品的維生素k1的色譜峰，對它的面積進(jìn)行積分處理。并代入到回歸方程，可以計算出樣品溶液中的維生素k1的含量。