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肌苷酸(IMP)是一種在RNA中發(fā)現(xiàn)的核苷酸,在酶的作用下可分解為次黃嘌呤。經(jīng)過科研證明,肌苷酸是一種風(fēng)味的核苷酸,通常情況下是由肌肉中的ATP降解而產(chǎn)生的。肌苷酸被廣泛的應(yīng)用在調(diào)味品和醫(yī)療等領(lǐng)域,用于能量傳遞和合成,信號調(diào)控,代謝中間產(chǎn)物等。
檢測樣本中的肌苷酸(IMP)含量,實驗室一般采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法等。以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測過程。
1.樣品處理
稱取0.2g的樣本,放入到2ml的離心管中,加入1ml的2.5%高氯酸,振蕩1min。低溫超聲20min,13000r/min離心20min,取上清液0.45um膜過濾,待測。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;柱溫25℃,0.035mol/L的磷酸二氫鈉(pH=6.8)為流動相,等度洗脫。流速1ml/min,進樣量10uL。紫外檢測器,波長259nm,僅供參考。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
精確稱取肌苷酸(IMP)10mg到10ml的容量瓶中,加入超純水定容,得到1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)母液,在-20℃避光保存。梯度稀釋6個濃度點,最低點在定量限,確保范圍可能在樣品的范圍內(nèi)。記錄各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值,依次進樣到HPLC中,測出來各個點的色譜峰,記錄保留時間,并對各個峰的峰面積進行積分。對應(yīng)峰的濃度點,可擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品含量計算
將樣品溶液進樣到HPLC,根據(jù)出峰的情況和保留時間,判斷出目標(biāo)峰的位置。對肌苷酸(IMP)的色譜峰的面積進行積分,并代入到回歸方程,得到樣品溶液中的肌苷酸(IMP)含量。