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芍藥色素是一種重要的花青苷類色素,其主要成分為芍藥皂苷和芍藥苷等。它主要來源于芍藥的花瓣,在酸性條件下呈紅色,在堿性條件下呈藍(lán)紫色。它微溶于水,卻溶于乙醇,丙酮,乙酸乙酯等,熱穩(wěn)定性差。具有抗炎,抗氧化,抗凝血等功能,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等多個(gè)領(lǐng)域。
常用的檢測方法,包括高效液相色譜(HPLC)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)等。以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測過程。
1.樣品處理
將植物樣本進(jìn)行粉碎,研磨,過篩,然后加入甲醇等有機(jī)溶劑,超聲,離心處理,膜過濾等步驟。具體參考相關(guān)的操作文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)報(bào)告。
2.色譜條件
根據(jù)芍藥色素的物理和化學(xué)性質(zhì),選擇C18的色譜柱,長度250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um,柱溫25℃,乙腈和水為流動相(11:89),等度洗脫,紫外檢測器,波長230nm,進(jìn)樣量10uL。根據(jù)實(shí)際出峰的情況,進(jìn)行參數(shù)的調(diào)整,盡可能的達(dá)到提取并分離出來,有效的顯示在色譜峰上。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
精密的稱量適量的芍藥色素標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇進(jìn)行溶解,制成1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)母液。然后,用甲醇進(jìn)行梯度稀釋,這個(gè)倍數(shù)要自己掌握,可以用2倍,也可以用5倍,盡可能的覆蓋到樣本溶液可能得濃度范圍。同時(shí),標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍要在檢測限的范圍內(nèi),確保測出來數(shù)據(jù)的可靠性。常規(guī)下,是稀釋成5-7個(gè)濃度點(diǎn)。通過確定好的色譜條件,測出對應(yīng)的色譜峰,在軟件上記錄保留時(shí)間,對峰面積進(jìn)行積分處理。在表格中,通過函數(shù)的方式,將峰面積和標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對應(yīng)起來,擬合成標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)1>R2>0.999。有的時(shí)候,還要看重復(fù)性,精密度,加標(biāo)回收率等。
4.含量計(jì)算
采用同樣的方法,將樣品溶液進(jìn)樣到HPLC中,等出峰之后通過比對保留時(shí)間,可以識別出目標(biāo)化合物的峰。對峰面積進(jìn)行積分,代入到回歸方程,是可以計(jì)算出樣品溶液中的芍藥色素含量。