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生物組織中丙酮酸含量的測定
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2025-05-28 | 34 次瀏覽 | 分享到:
丙酮酸是糖酵解過程的關(guān)鍵中間產(chǎn)物,在肌肉中會轉(zhuǎn)化為乳酸,或通過三羧酸循環(huán),參與到細胞的能量代謝。是許多生物合成途徑的前體,可轉(zhuǎn)化為氨基酸,脂肪酸和糖原等。當出現(xiàn)饑餓的時候,丙酮酸會起到調(diào)節(jié)作用,幫助維持血液酸堿平衡。丙酮酸具有一定的抗氧化作用,減少自由基的產(chǎn)生,保護細胞免受氧化應(yīng)激的影響。在細胞內(nèi),丙酮酸可以作為信號分子,通過影響酶的活性,參與細胞的生長、分化和凋亡等過程。丙酮酸還參與脂肪酸的合成和分解,維持脂肪的代謝平衡。大蒜中丙酮酸的含量比較高。

丙酮酸是糖酵解過程的關(guān)鍵中間產(chǎn)物,在肌肉中會轉(zhuǎn)化為乳酸,或通過三羧酸循環(huán),參與到細胞的能量代謝。是許多生物合成途徑的前體,可轉(zhuǎn)化為氨基酸,脂肪酸和糖原等。當出現(xiàn)饑餓的時候,丙酮酸會起到調(diào)節(jié)作用,幫助維持血液酸堿平衡。丙酮酸具有一定的抗氧化作用,減少自由基的產(chǎn)生,保護細胞免受氧化應(yīng)激的影響。在細胞內(nèi),丙酮酸可以作為信號分子,通過影響酶的活性,參與細胞的生長、分化和凋亡等過程。丙酮酸還參與脂肪酸的合成和分解,維持脂肪的代謝平衡。大蒜中丙酮酸的含量比較高。


丙酮酸有3個碳,屬于三碳酸類化合物,具有特殊的果香氣息?;瘜W結(jié)構(gòu)為CH3COCOOH,包含1個酮基(C=O)和1個羧基(COOH),具有強烈的酸性,能和堿反應(yīng)生成丙酮酸鹽。溶于水、氯仿和甲醇,但不溶于 二乙醚。通過醛縮反應(yīng)轉(zhuǎn)化為 丙酮 和 碳酸酯,在還原劑的作用下被還原為丙醇 ,并且在加熱條件下能夠脫水生成丙烯酸。


測定生物組織中丙酮酸含量的方法,常用到高效液相色譜(HPLC)。


1.樣品處理


稱取樣品4g,放入15min離心管中,加入5ml的水,4℃超聲30min,4℃冰箱靜置2h,取出4000r/min離心10min,定容10ml后0.45um膜過濾待測。


2.色譜條件


C18色譜柱,250*4.6mm,5μm,柱溫30℃;紫外檢測器或VWD,波長210nm;流速1ml/min,10-20uL。0.1%磷酸水:甲醇=97.5:2.5為流動相,等度洗脫,或采用乙腈-磷酸二氫鉀(梯度洗脫)。


3.標準曲線


確定標準曲線的時候,需要對標準品溶解并進行成倍的稀釋,大約5-7個點,一般用6個濃度。要進行脫氣處理,進樣的HPLC測出各個濃度的色譜峰,記錄保留時間,對色譜峰面積積分,對應(yīng)這個峰的濃度,擬合標準曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)需要1>R2>0.999。


4.含量計算


將樣品溶液按對應(yīng)的體積要求,可以手動進樣,也可以自動進樣。根據(jù)保留時間,確定出樣本的目標色譜峰,對這個色譜峰面積進行積分,代入到回歸方程,可以計算出樣本溶液中的丙酮酸含量。


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