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維生素K是一種具有葉綠醌生物活性的維生素,具有異戊二烯類側(cè)鏈的萘醌類化合物,它包括了k1,k2,k3,k4等幾種形式。其中,k1,k2是天然存在的,是脂溶性維生素。維生素k的性質(zhì)是比較穩(wěn)定,耐熱,耐酸。但在光下敏感,容易被紫外線分解。維生素k1和k2不溶于水,但溶于甲醇,丙酮,苯,石油醚,氯仿等有機(jī)溶劑。而維生素k3和k4是水溶性的,溶于四氯化碳,氯仿,乙醇等。含維生素k1比較高的蔬菜和水果有菠菜,香菜,萵苣,藕,西紅柿,獼猴桃,藍(lán)莓等,另外在蛋黃和大豆油中也有發(fā)現(xiàn)。
科研實(shí)驗(yàn)室檢測樣品中的維生素k含量,一般會(huì)用到高效液相色譜(HPLC)法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法、熒光檢測法,酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法等
以HPLC測維生素K1為例,簡單的介紹一下檢測流程。它的原理:樣品中的維生素K1經(jīng)有機(jī)溶劑提取后,經(jīng)失活的磷酸鹽處理過的氧化鋁色譜柱進(jìn)行凈化,再用液相色譜法將維生素K1分離,測定色譜峰,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的維生素k1的含量。
色譜條件:C18的色譜柱,比如250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑,柱溫20℃;以乙酸水和甲醇為流動(dòng)相,流速為0.5-1ml/min。進(jìn)樣量5-10ul,紫外檢測器,波長254nm等。僅供參考,如需測試,需要重新驗(yàn)證或開發(fā)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:使用維生素k1的標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇進(jìn)行溶解,成倍的,梯度稀釋5-7個(gè)點(diǎn),在檢測器的線性范圍內(nèi)。根據(jù)色譜條件,測出各個(gè)濃度點(diǎn)的色譜峰。對色譜峰面積進(jìn)行積分,對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,在坐標(biāo)軸上描點(diǎn)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2>0.999。
樣品測定:將處理好的樣品,或進(jìn)行必要的稀釋,進(jìn)樣到hplc中,記錄色譜峰和數(shù)據(jù)。對色譜峰面積也進(jìn)行積分,根據(jù)回歸方程,可以計(jì)算出樣品中的維生素k1的含量。