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呈味核苷酸是由核苷酸組成的一種鮮味劑,能讓食物的滋味更鮮美。它本身是營(yíng)養(yǎng)品,補(bǔ)充體內(nèi)的核苷酸。常見(jiàn)的呈味核苷酸,包括鳥(niǎo)呈味核苷酸(IMP)、肉呈味核苷酸(IMP)、雞呈味核苷酸(IMP)等。它的合理的用量下是安全的,如果過(guò)量的攝入,可能會(huì)產(chǎn)生副作用。易溶于水,微溶于丙酮、乙醚和乙醇。呈味核苷酸二鈉是味精的升級(jí),廣泛應(yīng)用于食品行業(yè),如肉類(lèi),醬油,紅燒肉等。呈味核苷酸的制備,包括化學(xué)和生物合成法。其中,生物合成法是利用微生物或酵母菌的發(fā)酵作用而產(chǎn)生的。
測(cè)定樣品中的呈味核苷酸的含量,實(shí)驗(yàn)室里面一般采用高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法等,用外標(biāo)法,即標(biāo)準(zhǔn)曲線的形式計(jì)算含量。這里以HPLC為例,簡(jiǎn)單的介紹一下測(cè)定過(guò)程。
1.樣品處理
不同種類(lèi)的樣品,處理的方式也是有所區(qū)別的。這里要說(shuō)的是,根據(jù)呈味核苷酸的化學(xué)性質(zhì),使用有機(jī)溶劑從樣品中提取處理。常用的方法,包括萃取,蒸餾,超聲,抽濾,膜過(guò)濾等方式。
2.色譜條件
使用C18色譜柱,250mm長(zhǎng),4.0mm內(nèi)徑,粒徑5um,柱溫30℃;流動(dòng)相為甲醇和乙酸銨溶液的混合物或醋酸-醋酸鈉緩沖液與甲醇(65:35),1ml/min,紫外檢測(cè)器,254nm;進(jìn)樣量10-20uL,僅供參考。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
為了能夠更準(zhǔn)確的反應(yīng)出樣品中的呈味核苷酸含量,科研檢測(cè)方面一般會(huì)用到外標(biāo)法,也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線,就是用標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定出來(lái)的色譜峰。以峰面積為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),在坐標(biāo)軸上描點(diǎn)劃線,形成一下近似的直線。標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2>0.999。這條線上,一般會(huì)有5-7個(gè)點(diǎn),用于更準(zhǔn)確的表達(dá)出標(biāo)準(zhǔn)品在色譜峰上的線性。這幾個(gè)點(diǎn),是從標(biāo)準(zhǔn)品溶解,成倍的稀釋而成的。標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的第一個(gè)點(diǎn),是要根據(jù)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)限來(lái)定的,一般是5-10倍的信噪比。
4.樣品測(cè)定
標(biāo)準(zhǔn)曲線是一把尺子,在同樣的色譜條件下,用來(lái)測(cè)樣品,記錄下色譜峰。根據(jù)色譜峰面積,標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程,可以計(jì)算出樣品中的呈味核苷酸含量。