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葛根素,是從中藥材葛根中分離提取出來的一種有機化合物,屬于異黃酮類衍生物。化學式為C21H20O9,分子量416.378.溶于甲醇,略微溶于乙醇和水,不溶于三氯甲烷或乙醚。在提取和分離的過程中,甲醇是相對理想的有機溶劑。在藥物研究的過程中,葛根素具有多方面的作用,比如改善血液循環(huán),調整血液微循環(huán),抗氧化,增強免疫等。豆科植物葛根生長在山坡草叢中或路旁及較陰濕的地方,花期是4-8月,果期8-10月,多年生。
檢測植物樣本中的葛根素含量,一般采用高效液相色譜(HPLC)法,在目前的藥典中也有詳細的記載,可以參考。
C18色譜柱(5μm,4.6×250 mm),柱溫:室溫;流動相:甲醇:水=25:75,流速:1ml/min;紫外檢測器,波長250nm,進樣量10uL,根據實際情況,需要對方法進行驗證。理論板數不低于4000,葛根素峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。
樣品制備:將植物樣本粉碎,過80目篩,精密稱量0.1g,放入具塞錐形瓶中。加入50ml有機溶劑(如乙醇),由于甲醇有一定的毒性,一般用乙醇來代替。加熱回流30min,補足,過濾。
標準品配制:精密稱量葛根素標準品,加入有機溶劑(乙醇),制成50ug/ml的溶液。成倍的、梯度稀釋5-7個點,確保在檢測器的優(yōu)良性能范圍內。
使用外標法,也就是標準曲線。通過色譜儀進行檢測并記錄峰面積,將峰面積與標準溶液濃度繪制標準曲線,得到回歸方程。以樣品的峰面積,結合回歸方程,計算出樣品中的葛根素含量。