L-蘋果酸是一種天然存在的有機酸，化學(xué)式為C4H6O5。在自然界中的水果中比較多，比如蘋果，葡萄，櫻桃等。L型是蘋果酸的一種立體異構(gòu)體，是一種手性結(jié)構(gòu)，具有特定的旋光性。L-蘋果酸溶于水和乙醇，是一種酸性較強的有機酸?？梢宰鳛槭称氛{(diào)節(jié)劑或酸味劑，用于食品工業(yè)，醫(yī)藥工業(yè)，日用化工等領(lǐng)域。從目前的科學(xué)研究情況來看，L-蘋果酸被認為是一種安全，無毒，無害的有機酸。

使用高效液相色譜（HPLC）法測L-蘋果酸的含量，需要經(jīng)過一系列的步驟。包括樣品的前處理，hplc色譜參數(shù)設(shè)置，色譜峰和數(shù)據(jù)處理，標(biāo)準(zhǔn)曲線，含量計算等。

1.前處理

將植物樣品進行粉碎，磨成粉，過篩。精確稱取4g，放置在15mL的離心管中，加入5mL的水，4℃超聲提取30min。放在4℃的冰箱靜置2h，取4000r/min離心10min，重復(fù)上述的操作兩次，用水定容到10mL，混勻，過濾膜。

2.色譜條件

采用常規(guī)的C18色譜柱，5um，250*4.6mm，柱溫30℃。VWD檢測器，波長210nm。0.1%磷酸水和甲醇為流動相，等度洗脫，流速為1ml/min。進樣量為10-20ul，僅供參考。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

這是一種外標(biāo)法，使用L-蘋果酸的標(biāo)準(zhǔn)品，進行溶解和定容，并記錄溶液濃度。此時，需要對標(biāo)準(zhǔn)溶液進行梯度，成倍的稀釋，至少6個濃度點。稀釋的濃度點，要覆蓋在檢測器有效的范圍內(nèi)。根據(jù)測定出來的色譜峰，對峰面積進行積分。對應(yīng)到標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，可以繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)r2＞0.999。

4.樣品測定

有時候，為了確保樣品檢測的準(zhǔn)確性，也有先測樣品，后測標(biāo)準(zhǔn)品的。在上述的色譜條件下，測定樣品，看出峰情況。對色譜峰面積進行積分，可以用自動的，也有手動的。使用標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，可以計算出樣品中L-蘋果酸的含量。為了確保準(zhǔn)確性，要考慮穩(wěn)定性，回收率等。