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植物甾醇有哪些檢測方法呢
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-12-30 | 245 次瀏覽 | 分享到:

在黃橙橙的玉米,雪白的芝麻,圓溜溜的大豆,飽滿的小麥,熟了的高粱等,以及堅(jiān)果和植物種子中,都可以提取出來一種植物甾醇。常見的植物甾醇,包括β-谷甾醇,菜油甾醇,豆甾醇,谷甾烷醇等。經(jīng)過研究證明,植物甾醇具有一定的抗氧化作用,能夠降低血液中的膽固醇。植物甾醇屬于三萜烯化合物,具有甾核或甾體。植物甾醇的結(jié)構(gòu)和膽固醇是非常相似的,不同的是植物甾醇C24處,通常會連接一個甲基或乙基基團(tuán)。



植物甾醇的檢測方法有多種,比如,高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法、液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)法、薄層分析法、比色法等。


以高效液相色譜(HPLC)法為離子,簡單的說明介紹一下。


檢測內(nèi)容包括:前處理方法,色譜條件,色譜峰,標(biāo)準(zhǔn)曲線,含量計算等。


1.前處理:樣品一般是植物,通常情況下采用超聲,或皂化的方法。比如,將待測的樣品,粉碎,研磨,加入乙酸乙酯溶劑。之后,進(jìn)行超聲處理。最后,使用乙酸乙酯定容。



2.色譜條件:使用HPLC檢測,采用高效的,優(yōu)質(zhì)的,C18色譜柱。柱溫30℃或指定的其他溫度。乙腈-水或甲醇-乙腈為流動相,流速為1.0ml/min。檢測器主要是蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD),如果是甾醇酯的話,有用紫外檢測器的。進(jìn)樣量的話,一般是10ul,根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。這些條件,都是要經(jīng)過驗(yàn)證才能使用的。在不同的實(shí)驗(yàn)條件,比如設(shè)備,樣品,溶劑,溫度等不同,測定的色譜條件也會有變化的。其主要目的,是盡可能的獲得準(zhǔn)確的,有效的色譜峰。



3.樣品中的甾醇,經(jīng)過色譜柱的吸附分配,在流動相下的沖洗下逐步分離出來。濃度由低到高,再有高到低,在檢測器中獲得對應(yīng)的信號,軟件中記錄成色譜峰的形式。對色譜峰面積進(jìn)行積分,通過稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,至少6個點(diǎn)的濃度,記錄對應(yīng)的色譜峰,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。



4.對樣品的測定,在一定程度上考驗(yàn)了色譜技術(shù)。為什么這么說呢?正常的情況下,樣品會分離出相對理想的色譜峰,能夠順利的完成含量計算。但是,有的時候會出現(xiàn)各種鬼峰,或色譜柱出現(xiàn)堵塞,或流動相和樣品出現(xiàn)反應(yīng),或壓力不夠,或溫度不穩(wěn)定。在標(biāo)準(zhǔn)的情況下,相當(dāng)于模擬實(shí)驗(yàn);有樣品的時候,就是真實(shí)的測定??赡軜悠分泻衅渌幕衔铮瑢α鲃酉嗷蛏V柱產(chǎn)生了一定的負(fù)面作用。它并不像標(biāo)準(zhǔn)品那樣純粹。


5.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,是可以得到植物對應(yīng)甾醇含量的。有的時候,需要注意相關(guān)系數(shù)r2和重復(fù)性RSD,回收率也是不能忽略的。在計算含量的時候,如果還要注意稀釋倍數(shù),否則出現(xiàn)的結(jié)果就不準(zhǔn)確了。


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