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植物甾醇酯一般是由植物甾醇和脂肪酸,通過酯化反應(yīng)而形成的。主要的甾醇酯有β-谷甾醇酯,豆甾醇酯,油菜甾醇酯。甾醇酯能夠在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為甾醇和脂肪酸,具備了甾醇和脂肪酸的兩大生理功能?;瘜W(xué)式為C29H50O,植物甾醇酯具有一定的抗氧化性,可以幫助中和自由基,降低氧化應(yīng)激對人體的傷害。一般是通過植物油經(jīng)過皂化,萃取,結(jié)晶等工藝提取,可以作為化學(xué)工業(yè)或藥物合成方面的原料和中間體。植物甾醇酯是一種脂溶性化合物,植物甾醇酯的油溶性遠(yuǎn)高于植物甾醇。
檢測植物甾醇酯含量的方法,有高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法,薄層色譜法等。
1.高效液相色譜(HPLC)法
將含有植物甾醇酯的待測樣品,加入乙酸乙酯溶劑中,超聲處理。用乙酸乙酯定容,可以得到待測的植物甾醇酯。
色譜條件:C18色譜柱,柱溫30℃;以乙腈和水為流動(dòng)相,流速為1.0ml/min;紫外檢測器,波長208nm。進(jìn)樣量10ul,僅供參考。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:采用標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行稀釋。成倍的,梯度的稀釋,至少6個(gè)點(diǎn)的濃度。確保這個(gè)濃度范圍,在檢測器的有效范圍。依據(jù)有效的色譜條件,測出色譜峰。對標(biāo)準(zhǔn)品各個(gè)濃度點(diǎn)的峰面積進(jìn)行積分,并結(jié)合對應(yīng)點(diǎn)的濃度,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。相關(guān)系數(shù)一般都是大于0.999,確保標(biāo)準(zhǔn)曲線是有用的,測出來的數(shù)據(jù)是可靠的。重復(fù)性也是要考慮的,確保測出的數(shù)據(jù)在特定范圍內(nèi)是穩(wěn)定的,可信的。
樣品測定:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的色譜條件,進(jìn)樣測定色譜峰。正常的,順利的情況下,對色譜峰進(jìn)行積分,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以計(jì)算出樣品中的甾醇酯含量。
2.氣相色譜(GC)法
使用氣相色譜法測甾醇酯含量,需對樣品進(jìn)行預(yù)處理。將樣品放在乙醇?xì)溲趸洠?,超聲,皂化,水解甾醇酯。正庚烷萃取,在水浴中使用吡啶進(jìn)行衍生化處理。
色譜條件:使用hp-5的高溫色譜柱,火焰離子化檢測器(FID),載氣用氦氣或氮?dú)?,進(jìn)樣量1-2ul。柱溫,初設(shè)溫度為150℃,以一定的速率升溫到300℃,并保持一段時(shí)間。檢測器一般設(shè)置300℃,分離比為10:1,根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。
同樣,采用標(biāo)準(zhǔn)曲線或內(nèi)標(biāo)法測定含量。
此外,還可以使用GC-MS,薄層色譜法測定。