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豆甾醇含量測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2025-07-10 | 14 次瀏覽 | 分享到:
豆甾醇主要來源于大豆、玉米、燕麥、花生等油料農(nóng)作物,屬于一種植物甾醇。化學(xué)式為C29H48O,易溶于醋酸乙酯,苯,氯仿等有機(jī)溶劑,微溶于丙酮和乙醇,幾乎不溶于水。豆甾醇含有多個(gè)羥基,可通過氫鍵和自由基結(jié)合,抑制氧化應(yīng)激,如提升超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)的活性,減少細(xì)胞氧化損傷。抑制炎癥因子(如IL-6,TNF-α)的生成,減輕炎癥反應(yīng)。

豆甾醇主要來源于大豆、玉米、燕麥、花生等油料農(nóng)作物,屬于一種植物甾醇?;瘜W(xué)式為C29H48O,易溶于醋酸乙酯,苯,氯仿等有機(jī)溶劑,微溶于丙酮和乙醇,幾乎不溶于水。豆甾醇含有多個(gè)羥基,可通過氫鍵和自由基結(jié)合,抑制氧化應(yīng)激,如提升超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)的活性,減少細(xì)胞氧化損傷。抑制炎癥因子(如IL-6,TNF-α)的生成,減輕炎癥反應(yīng)。


檢測樣本中的豆甾醇的含量,主要方法包括高效液相色譜(HPLC),氣相色譜(GC)等。以HPLC為例,簡單的介紹一下流程。如要實(shí)驗(yàn)操作,可參考相關(guān)的文獻(xiàn)資料或操作規(guī)程,確保有成功的案例可依據(jù)。


1.樣品處理


將植物的樣本進(jìn)行粉碎過篩處理,加入乙酸乙酯進(jìn)行超聲提取,定容,最后進(jìn)行膜過濾。


2.色譜條件


C18的色譜柱,250mm或150mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑。柱溫為室溫。以乙腈-水或甲醇-水(97:3)為流動(dòng)相,等度洗脫。紫外檢測器,波長210nm或蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)。流速0.8-1ml/min,進(jìn)樣量10-20uL。僅供參考,在實(shí)際操作過程中,需要結(jié)合樣本的特性或周邊環(huán)境進(jìn)行設(shè)置。如果色譜峰出現(xiàn)不規(guī)則的情況,需要適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。


3.標(biāo)準(zhǔn)曲線


標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過梯度稀釋的6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度點(diǎn),對應(yīng)它的色譜峰面積,在表格中擬合出來的。同時(shí),保證標(biāo)準(zhǔn)曲線過坐標(biāo)軸的原點(diǎn),上方的回歸方程相關(guān)系數(shù)r2大于0.999,并接近于1。


4.含量測定


樣本溶液進(jìn)到HPLC中,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間,可以找到豆甾醇的色譜峰。外在的色譜條件都沒有變化,出峰的時(shí)間也不會(huì)變的。對這個(gè)樣本的色譜峰面積進(jìn)行積分,并代入到回歸方程,可計(jì)算出樣本溶液中的豆甾醇含量。


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