環(huán)磷酸鳥苷（簡稱cGMP）是細(xì)胞內(nèi)的第二信使分子，主要通過激活蛋白激酶G調(diào)控多種生理功能。它是由鳥苷三磷酸（GTP）經(jīng)過鳥苷酸環(huán)化酶（GC）催化生成，并經(jīng)過磷酸二酯酶（PED）分解。主要功能包括信號(hào)傳導(dǎo)和生理調(diào)節(jié)，血管舒張，視覺傳導(dǎo)，心血管系統(tǒng)保護(hù)，神經(jīng)和代謝條件，細(xì)胞增殖和凋亡等。在植物體內(nèi)，cGMP調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的能量轉(zhuǎn)化過程。

通常的情況下，使用高效液相色譜（HPLC）測定樣本中的cGMP的含量。簡單的介紹一下HPLC測定的流程，如下所示。

1.樣品前處理

精確稱取0.2g試樣于 2mL 離心管，加入 1mL 2.5%高氯酸水溶液，放置振蕩器振蕩1min，低溫超聲 20min，13000r/min 離心 20min，上清液過0.45μm濾膜，待測。

2.色譜條件（僅供參考）

檢測器：VWD，波長：259nm。色譜柱：TSKgel ODS-100V（250*4.6mm;5μm ）柱溫：25℃ 。 流動(dòng)相：0.035mol/L 磷酸二氫鈉（pH=6.8）等度洗脫，流速：1ml/min。 進(jìn)樣量：10μL。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱取cGMP的標(biāo)準(zhǔn)瓶，溶解配制成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)母液。梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn)，盡可能的覆蓋到樣本溶液可能的范圍?？梢酝ㄟ^信噪比找到定量限，也可以查詢相關(guān)的文獻(xiàn)資料，看到最高的濃度范圍。這樣，就知道每次要稀釋多少倍了。依次進(jìn)樣到HPLC中，測出色譜峰，記錄保留時(shí)間。對6個(gè)色譜峰分別進(jìn)行積分，結(jié)合它的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，可以擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。

4.含量計(jì)算

將樣品溶液進(jìn)到HPLC中，根據(jù)出峰情況進(jìn)行調(diào)整。通過保留時(shí)間，可識(shí)別出cGMP的色譜峰。對這個(gè)樣品的色譜峰面積進(jìn)行積分，代入到回歸方程，可計(jì)算出樣品溶液中的cGMP含量。