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蕓香苷是從植物中提取出來(lái)的一種天然黃酮類化合物,常見于蕎麥、柑橘、槐花、蘆筍等植物中,可通過(guò)水或乙醇提取。經(jīng)過(guò)科研研究證明,蕓香苷具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)免疫,以及增強(qiáng)毛細(xì)血管韌性等作用,常應(yīng)用于膳食補(bǔ)充、食品工業(yè)等。蕓香苷的化學(xué)式為C27H30O16,分子量為610.518,能溶于吡啶、甲酰和堿液,微溶于乙醇、丙酮和乙酸乙酯。屬于黃酮醇配糖體,主要由葡萄糖和鼠李糖兩種配糖體組成?;瘜W(xué)結(jié)構(gòu)包括1個(gè)苯環(huán)、三個(gè)酚羥基和一個(gè)糖苷鍵。
檢測(cè)蕓香苷含量的方法,實(shí)驗(yàn)室一般采用高效液相色譜(HPLC),紫外-可見分光光度法等。這里以HPLC為例,簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)流程。
1.樣品提取
用高精密的電子天平稱取0.2g的研磨好的樣本,將樣本倒入到15ml的離心管中,再加入5ml的80%甲醇水,振蕩1min,室溫超聲30min,4000r/min離心10min。這一系列的操作過(guò)后,將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中,剩下的殘?jiān)儆?0%甲醇水5ml重復(fù)操作一下,合并上清液,氮吹到2ml。最后,用0.22um膜過(guò)濾,待測(cè)。
2.色譜條件
用C18的反相色譜柱,250mm長(zhǎng),內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um;柱溫的話,可以設(shè)置30℃,根據(jù)實(shí)際環(huán)境進(jìn)行調(diào)整。另外,用0.1%磷酸水和甲醇為流動(dòng)相,梯度洗脫,流速為0.8-1ml/min??梢杂肈AD的檢測(cè),280nm,進(jìn)樣量10-20uL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解,并梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),覆蓋到樣本溶液的可能濃度范圍,確保檢測(cè)限和定量限。根據(jù)測(cè)出來(lái)的色譜峰面積和對(duì)應(yīng)的濃度,擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品測(cè)定
通過(guò)自動(dòng)或手動(dòng)進(jìn)樣的方式,到HPLC中記錄色譜峰的情況。根據(jù)保留時(shí)間,記錄目標(biāo)化合物的色譜峰,對(duì)峰面積進(jìn)行積分,代入到回歸方程,就可計(jì)算出樣本溶液中的蕓香苷含量。