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白術(shù)內(nèi)酯是從中草藥白術(shù)中提取出來的一種倍半萜類化合物,包含白術(shù)內(nèi)酯I,II,III三種結(jié)構(gòu),核心結(jié)構(gòu)含有內(nèi)酯環(huán)和倍半萜骨架。白術(shù)內(nèi)酯能通過抑制NF-kB等炎癥信號通路,減少炎癥因子如TNF-α,IL-6的釋放。同時,還有免疫調(diào)節(jié),胃腸道保護等作用。白術(shù)在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品,具有溫、甘、苦,補脾益氣,燥濕利水等能力。
實驗室檢測白術(shù)內(nèi)酯含量,一般會采用高效液相色譜(HPLC)法。如果要測3個結(jié)構(gòu)的,就要這3個結(jié)構(gòu)的標(biāo)準品,擬合標(biāo)準曲線,根據(jù)回歸方程,計算含量。當(dāng)然,也有采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS),通過離子峰的形式定量計算。以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測流程。如果要自己做,或可以咨詢或檢索相關(guān)的文獻資料,獲得更為準確的參數(shù)和操作步驟。
1.樣品處理
將植物樣品進行粉碎處理,并過100目篩,稱取1g的粉末,倒入容量瓶中,加入15ml的甲醇,超聲處理,冷卻出來后用甲醇稀釋到刻度,0.45um膜過濾,待測。
2.色譜條件
選擇適合的色譜柱,比如C18的柱子(250mm×4.6mm,5μm),柱溫25-30℃,以甲醇和純水為流動相,等度洗脫,流速為1ml/min;紫外檢測器,波長220nm。僅供參考,以實際測定為準。
3.標(biāo)準曲線
精確的稱量白術(shù)內(nèi)酯I,II,II的標(biāo)準品若干克,用甲醇溶解,并成倍的稀釋5-7個濃度點。其中,最低點為定量限,一般為信噪比S/N的10倍。依次進樣到HPLC中,測定出對應(yīng)的色譜峰。記錄色譜峰的保留時間,并對色譜峰面積進行積分處理。擬合標(biāo)準曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)R2要大于0.999,越接近1線性越好。
4.含量計算
將樣品注入HPLC中,和標(biāo)準品相同的色譜條件,識別出目標(biāo)色譜峰,對峰面積進行積分,代入到回歸方程,就可計算出樣品溶液中的3個白術(shù)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的含量。將它們在一起,因為樣品溶液是經(jīng)過稀釋的,需要考慮到稀釋倍數(shù),結(jié)合計算才能得到樣品中的白術(shù)內(nèi)酯含量。