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飛燕草素是一種花青素類化合物,主要來源于藍(lán)莓,黑莓,紫甘藍(lán),紫薯等有重顏色的植物或水果。具有清楚自由基,抑制炎癥因子,降低低密度脂蛋白(LDL)氧化,抑制β-淀粉樣蛋白沉積等作用。通常情況下,它的化學(xué)結(jié)構(gòu)是2-苯基苯并吡喃陽離子為核心,包含多個(gè)羥基。化學(xué)式為C15H11CIO7,易溶于水、甲醇、乙醇等極性溶劑。其在酸性條件下呈紅色,隨著pH值升高逐漸變?yōu)樽仙?、藍(lán)色,顯示出明顯的酸堿變色特性。具有多種糖苷結(jié)合形式,如飛燕草素-3-0-半乳糖苷,飛燕草素-3-0-葡萄糖苷,飛燕草素-3-0-蕓香糖苷,飛燕草素-3-0-5-0-二葡萄糖苷等。
檢測方法:常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室一般用高效液相色譜(HPLC),超高液相色譜(UPLC),液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS),薄層色譜等。以HPLC為例,簡單的介紹一下。
1.樣品處理
選擇新鮮的花瓣或葉片等,在陰涼的地方自然晾干或采用冷凍干燥技術(shù)進(jìn)行處理。將干燥的樣本粉碎或研磨成粉后,采用有機(jī)溶劑,比如甲醇,乙酸乙酯等,超聲波提取,膜過濾待測。
2.色譜條件
植物色素一般用紫外檢測器,波長通常為520nm。采用C18的色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑,柱溫30℃,根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。用甲醇和水,或0.1%甲酸水和乙腈,梯度洗脫。流速1mL/min,進(jìn)樣量10-20uL。僅供參考。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
將飛燕草素標(biāo)準(zhǔn)品用流動(dòng)相溶解制成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)母液,依次成倍的稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),確保樣本的溶液可能在這個(gè)范圍內(nèi),并滿足檢測器的檢測限。根據(jù)HPLC色譜條件,測出對應(yīng)的色譜峰,記錄峰的保留時(shí)間和峰面積。對色譜峰面積進(jìn)行積分,并記錄在表格中,對應(yīng)它的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)R2要大于0.999并接近于1。另外,標(biāo)準(zhǔn)曲線要經(jīng)過原點(diǎn),否則就會存在系統(tǒng)誤差。
4.含量計(jì)算
樣本溶液的測定步驟和標(biāo)準(zhǔn)品是相似的,通過標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰保留時(shí)間,可以識別出樣本的目標(biāo)化合物峰。對樣本峰面積進(jìn)行手工或自動(dòng)積分,將峰面積代入到回歸方程,計(jì)算出飛燕草素含量。
檢測飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥素和錦葵色素等植物色素。