維生素K12是一種脂溶性的維生素，具有葉綠醌生物活性的萘醌基團(tuán)的衍生物，是人體必需的維生素之一，來(lái)源于動(dòng)物肝臟、蛋類(lèi)、綠葉蔬菜等。維生素K12是一系列萜烯側(cè)鏈化合物的統(tǒng)稱(chēng)，以異戊二烯為結(jié)構(gòu)單元，根據(jù)側(cè)鏈碳原子數(shù)的不同，可分為K2(10)、K2(20)、K2(35)、K2(40)等。維生素K2的作用主要是預(yù)防骨質(zhì)疏松，促進(jìn)凝血酶原的形成，具有利尿，強(qiáng)化肝臟的解毒功能。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，包括高效液相色譜（HPLC），氣相色譜（GC），氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS），酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法等。以HPLC為例，簡(jiǎn)單的介紹一下操作流程，可參考GB 5009.290-2023的具體方法。

1.樣品處理

精密稱(chēng)取試樣20mg放入到10ml的容量瓶中，加入異丙醇超聲30min，用異丙醇定容到刻度，搖勻，0.45um膜過(guò)濾，待測(cè)。

2.色譜條件

C18色譜柱，150mm長(zhǎng)，4.6mm內(nèi)徑，5um粒徑，柱溫50℃，也有用25℃，根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況來(lái)定。以甲醇為流動(dòng)相，也有用正己烷和異丙醇的，等度洗脫，流速1ml/min。紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)254nm；進(jìn)樣量10ul，根據(jù)樣本濃度和雜質(zhì)程度調(diào)整。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

舉例，以四烯甲奈醌（MK-4）為標(biāo)準(zhǔn)品，配制成2g/L的維生素K2標(biāo)準(zhǔn)溶液，在進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)热?0-200mg/L的6個(gè)濃度點(diǎn)。以上述的色譜條件，進(jìn)樣HPLC，測(cè)出各個(gè)濃度的色譜峰，記錄峰的保留時(shí)間和峰面積。對(duì)峰面積進(jìn)行積分，對(duì)應(yīng)到標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，可繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得的回歸方程，相關(guān)系數(shù)r2大于0.999?？煽紤]加標(biāo)回收率，重復(fù)性等方法學(xué)。

4.含量計(jì)算

將樣品溶液進(jìn)樣到HPLC，和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的色譜條件相同，根據(jù)測(cè)出色譜峰的保留時(shí)間，識(shí)別出目標(biāo)化合物。對(duì)樣品色譜峰面積進(jìn)行積分，代入到回歸方程，計(jì)算出維生素K2的含量。