dATP是脫氧腺苷三磷酸的簡(jiǎn)寫(xiě)，它的化學(xué)結(jié)構(gòu)和ATP是相似的，只是少了一個(gè)五碳糖2號(hào)碳上的-OH，取而代之的是一個(gè)單獨(dú)的氫原子。從結(jié)構(gòu)上來(lái)看，dATP是由一個(gè)脫氧核糖，磷酸和腺嘌呤組成的。在NDA復(fù)制的過(guò)程中，DNA聚合酶利用dATP作為原料，通過(guò)磷酸二酯鍵連接起來(lái)，形成DNA鏈。

檢測(cè)樣品中dATP含量的方法，包括高效液相色譜（HPLC），毛細(xì)管電泳（CE），液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS），酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法。以HPLC為例，簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)流程。

1.樣品處理

將含有dATP的樣品進(jìn)行溶解，稀釋，過(guò)濾，有機(jī)溶劑的萃取，衍生化處理，待測(cè)。

2.色譜條件

如C18色譜柱（250*4.6mm，5um），柱溫30-40℃；甲醇和0.1%磷酸溶液（pH2.5）梯度洗脫，流速1ml/min。紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量10uL。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解和稀釋，用流動(dòng)相有機(jī)溶劑梯度稀釋6個(gè)濃度并記錄。通過(guò)HPLC依次測(cè)出對(duì)應(yīng)的色譜峰，記錄保留時(shí)間和峰面積。對(duì)峰面積進(jìn)行積分，對(duì)應(yīng)到它的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)r2＞0.999。

4.樣品測(cè)定和計(jì)算

對(duì)樣品也進(jìn)HPLC測(cè)定它的色譜峰，在保留時(shí)間的地方找到目標(biāo)峰，記錄色譜峰面積。對(duì)面積進(jìn)行積分，代入到回歸方程，可以計(jì)算出樣品中的dATP含量。同時(shí)，也需要考慮到回收率，線性范圍，檢出限，重復(fù)性等。