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吲哚乙酸,也稱為吲哚-3-乙酸(AA),是一種植物生長(zhǎng)素。吲哚乙酸在植物的幼嫩葉片和頂端分生組織中合成,通過(guò)韌皮部長(zhǎng)距離傳輸。植物體內(nèi)的生長(zhǎng)素是由色氨酸通過(guò)一系列的代謝中間產(chǎn)物而形成的,主要途徑是通過(guò)色氨酸通過(guò)氧化脫氨成為吲哚丙酮酸,而后脫羧而成吲哚乙醛,再氧化成吲哚乙酸。
生長(zhǎng)素對(duì)植物的作用是比較微妙的,低濃度的時(shí)候可以促進(jìn)生長(zhǎng),而高濃度的時(shí)候會(huì)抑制生長(zhǎng)。生長(zhǎng)素的分布比較廣泛,主要集中在生長(zhǎng)旺盛的地方,如胚芽鞘、芽、根頂端的分生組織、形成層、發(fā)育中的種子和果實(shí)等處。生長(zhǎng)素在植物體內(nèi)的運(yùn)輸有3種方式:橫向運(yùn)輸,極性運(yùn)輸,非極性運(yùn)輸。
由于植物體內(nèi)的吲哚乙酸含量并不是固定不變的,會(huì)隨著氣候,部位等變化。低濃度的生長(zhǎng)素有利于植物生長(zhǎng),因此它的含量是微量的。檢測(cè)方法,一般包括高效液相(HPLC),液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)等。
1.樣本前處理
一般是植物的樣本,,在液氮下研磨后充分混勻,加入異丙醇:水:甲酸(80:19:1)混勻。放在4℃的冰浴中超聲1h,浸提液用10000r/min離心10min,得到上清液。再加入1ml二氯甲烷,低溫超聲提取30min,10000r/min離心10min得上清液。室溫氮?dú)鉁p壓至水相,定容至1ml,振蕩混勻,用甲醇稀釋2倍后過(guò)0.22μm濾膜,待測(cè)。
2.色譜條件
C18的色譜柱,2.1*100mm 1.7μm,柱溫35℃;流動(dòng)相A-0.1%甲酸水,B-乙腈,梯度洗脫,流速0.3ml/min。MS條件:氣簾氣35 psi,碰撞氣7psi,離子噴霧電壓+5500V、-4500V
離子模式 ESI±模式,離子源溫度:450 °C(離子源氣體)IonSource Gas1:40psi(離子源氣體)IonSource Gas2:50psi
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),配制成標(biāo)準(zhǔn)工作液。將配制好的標(biāo)準(zhǔn)工作線依次上機(jī)測(cè)定,檢測(cè)6個(gè)濃度點(diǎn)的質(zhì)譜峰。根據(jù)質(zhì)譜峰面積和對(duì)應(yīng)濃度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得的回歸方程。
4.樣品測(cè)定和計(jì)算
將處理后得到的待測(cè)液,上機(jī)檢測(cè),根據(jù)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)來(lái)確認(rèn)目標(biāo)峰保留位置,得到峰面積數(shù)據(jù),根據(jù)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品稀釋倍數(shù),計(jì)算實(shí)際樣品中的含量。