生物素，其實(shí)是維生素H，是B族維生素，也是水溶性維生素。它是合成VC的必要物質(zhì)，是脂肪和蛋白質(zhì)代謝過(guò)程中不可缺少的，也是人體生長(zhǎng)和發(fā)育必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。生物素的來(lái)源比較廣泛，比如雞蛋，肉類等。當(dāng)然，植物中也是非常多的，特別是豆類，堅(jiān)果，種子，蔬菜和谷物，甚至連香蕉這樣的水果都含有。生物素的化學(xué)式為C??H??N?O?S，分子量為244.31，可溶于水、酒精、氯仿、二甲亞砜等溶劑。生物素促進(jìn)生物體內(nèi)的物質(zhì)代謝，維持神經(jīng)系統(tǒng)功能，增強(qiáng)免疫力，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育。

檢測(cè)樣品中的生物素含量，科研實(shí)驗(yàn)室的方法是高校液相色譜（HPLC）法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）法、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法。以HPLC為例，簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)流程，如需操作，要查詢相關(guān)的文獻(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)程。

1.樣品處理

不同的樣品，處理方法是有差異的。比如，使用0.1mol/L的NaOH溶解，并在60℃水浴中振蕩提取或超聲30min，之后再進(jìn)行高速離心，過(guò)0.45um的濾膜。

2.色譜條件

使用hplc就是要懂怎么設(shè)置條件，通過(guò)各種因素的整合，從而得的目標(biāo)化合物的色譜峰。這個(gè)不僅要考慮目標(biāo)化合物的物理化學(xué)性質(zhì)，還需要結(jié)合色譜的知識(shí)，獲得相對(duì)可靠的數(shù)據(jù)結(jié)果。比如，C18色譜柱，長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5um；柱溫35℃；流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液：乙腈=85:15，流速為1ml/min；紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)210nm，進(jìn)樣量10-20ul。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)曲就是用標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)溶解稀釋，配制出5-7個(gè)呈梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。用流動(dòng)相或特定的有機(jī)溶劑溶解，那就有問(wèn)題出現(xiàn)了。要溶解到什么濃度，這最低點(diǎn)的濃度應(yīng)該是多少，不能隨便配一些梯度就上機(jī)吧。這個(gè)就要考慮檢測(cè)器的特性，找到檢測(cè)的有效線性范圍，比如檢測(cè)限的5-10倍。

當(dāng)色譜出峰的時(shí)候，對(duì)各個(gè)濃度點(diǎn)的色譜峰面積進(jìn)行積分，手動(dòng)或自動(dòng)。以各個(gè)點(diǎn)的濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)色譜峰面積為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)軸上描點(diǎn)劃線，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線?？梢缘玫交貧w方程，確保相關(guān)系數(shù)r2＞0.999，這樣測(cè)出來(lái)的數(shù)據(jù)，標(biāo)曲才是有效的。當(dāng)然，為了確保數(shù)據(jù)可靠，還需要考察重復(fù)性。

4.樣品測(cè)定

對(duì)樣品的測(cè)定，如果覺(jué)得比較難，怕標(biāo)準(zhǔn)品會(huì)污染色譜柱，也可以考慮先測(cè)樣品，后用標(biāo)準(zhǔn)品。當(dāng)然，方法都是一樣的，只是濃度不一樣。我們可以測(cè)出來(lái)樣品的色譜峰，當(dāng)基礎(chǔ)條件都一致的情況下，根據(jù)色譜峰面積和回歸方程，是可以計(jì)算出樣品中的生物素含量。