煙堿，有稱為尼古丁，化學(xué)式C10H14N2，分子量為162.2，有毒。易溶于水，也溶于乙醇、乙醚、丙酮等有機(jī)溶劑。它主要存在于茄科植物中，煙草中含有的生物堿之一?？茖W(xué)研究證明，它會(huì)通過(guò)血液循環(huán)傳輸?shù)酱竽X，刺激中樞神經(jīng)產(chǎn)生心理和生理效應(yīng)。

檢測(cè)樣品中煙堿含量的方法有多種，比如氣相色譜（GC）法、高效液相色譜（HPLC）法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）法、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、紫外分光光度法等。

以高效液相色譜（HPLC）法為例，簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)過(guò)程。

樣品前處理：將樣品磨碎成粉末，用有機(jī)溶劑如75%的甲醇溶解，并用超聲提取30min。具體的操作步驟，需要參考相關(guān)的文獻(xiàn)資料或操作規(guī)程。

色譜條件：hplc的色譜條件，是根據(jù)樣品的物理和化學(xué)性質(zhì)來(lái)確定的。使用常規(guī)的C18色譜柱，如150mm長(zhǎng)，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5um，柱溫30-40℃；用0.1mol/L的磷酸二氫鉀和磷酸緩沖溶液（pH2.5）或者甲醇-磷酸或甲醇-水（0.1%磷酸），等度或梯度洗脫，流速1ml/min；紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量5-10ul。僅供參考，實(shí)際操作過(guò)程中，需要對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證，或重新開(kāi)發(fā)出來(lái)。不同的設(shè)備和環(huán)境條件，測(cè)試的色譜條件是會(huì)有差異的。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解，逐步的，梯度稀釋5-7個(gè)濃度點(diǎn)。有人說(shuō)，怎么確定最低點(diǎn)的濃度呢？這個(gè)要看檢測(cè)器的有效的檢測(cè)范圍，也就是檢測(cè)限或定量限，通過(guò)信噪比的倍數(shù)，確定出您需要的最低的濃度點(diǎn)。通過(guò)成熟的或驗(yàn)證成功的色譜條件，測(cè)出各個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰。對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分，對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，描點(diǎn)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)。為什么說(shuō)是標(biāo)準(zhǔn)曲線，其實(shí)它是一條線，用它來(lái)計(jì)算樣品的濃度的。因?yàn)橐粭l線上有無(wú)數(shù)個(gè)點(diǎn)，不知道樣品的色譜峰面積是在哪個(gè)點(diǎn)，就用一條直線來(lái)測(cè)量。看標(biāo)曲做的好不好，其實(shí)也是有要求的，比如相關(guān)系數(shù)r2＞0.999，重復(fù)性RSD符合要求等。

樣品測(cè)定：樣品測(cè)試過(guò)程和標(biāo)準(zhǔn)品是相似的，根據(jù)測(cè)出來(lái)的色譜峰，對(duì)面積進(jìn)行手動(dòng)或自動(dòng)積分。結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品中的煙堿含量。