cAMP是3,5-環(huán)腺苷酸，是一種有機(jī)物，是細(xì)胞內(nèi)的第二信使。也就是二傳，當(dāng)?shù)谝恍攀辜せ盍讼佘账岘h(huán)化酶，就催化ATP環(huán)化形成。因此，它的信號(hào)能不能傳遞，是否繼續(xù)，是要依賴于蛋白激酶A的。當(dāng)然，cAMP在有的微生物中，也參與了轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用。它的作用，主要是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)代謝和生物學(xué)功能，在臨床方面也有一定的研究。從病理學(xué)角度來(lái)看，cAMP和一些疾病的產(chǎn)生，傳導(dǎo)了有效的信號(hào)。

檢測(cè)cAMP的方法有很多，其中包括了高效液相色譜（HPLC）法，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法。

1.高效液相色譜（HPLC）法

HPLC測(cè)定cAMP含量，需要經(jīng)過(guò)前處理，色譜條件，樣品測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線，含量計(jì)算等步驟。利用樣品中化合物在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異，進(jìn)行分離和測(cè)定。

色譜條件：C18的色譜柱，柱溫30℃；流動(dòng)相：A相為磷酸鹽緩沖液，B相為乙腈，洗脫方式需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)來(lái)定，流速1.0ml/min；紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)258nm；進(jìn)樣量10-20uL，僅供參考。一般情況下，要對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解，梯度稀釋至少5-7個(gè)點(diǎn)，最低點(diǎn)要是檢測(cè)限的5倍左右。上機(jī)測(cè)定，出現(xiàn)色譜峰。以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，要r2＞0.999，以確保線性。重復(fù)性和回收率也是需要考慮的。

樣品測(cè)定：樣品的測(cè)定，和標(biāo)準(zhǔn)品的操作是相似的。如果怕標(biāo)準(zhǔn)品污染，可以先測(cè)樣品。根據(jù)測(cè)定出來(lái)的色譜峰，對(duì)面積進(jìn)行積分，根據(jù)回歸方程，計(jì)算出含量。

2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

往預(yù)先包被環(huán)磷酸腺苷（cAMP）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。