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麥角甾醇是什么呢?其實(shí),它還有一個(gè)名字叫麥角固醇。這是通過微生物發(fā)酵合成而來的,不僅具有獨(dú)特的生理作用,比如抗菌、抗炎、抗氧化等,還被廣泛的用在藥物開發(fā)領(lǐng)域。麥角甾醇是真菌細(xì)胞膜的重要組成部分,結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,專一性強(qiáng)。怎么說呢?如果要測(cè)真菌的生物量,可以通過測(cè)麥角甾醇的含量來代表了。那么,麥角甾醇在細(xì)胞中起到什么作用呢?它能夠確保細(xì)胞富有活力,保持膜結(jié)合蛋白的活性,細(xì)胞物質(zhì)代謝的過程中可以起到運(yùn)輸大隊(duì)長的作用。
檢測(cè)樣本中麥角甾醇的含量,常用的方法有氣相色譜(GC)法、紫外分光光度法、高效液相色譜(HPLC)法等。HPLC是檢測(cè)麥角甾醇的常用方法,不同的樣品采用的方法也是一點(diǎn)差別的。液相檢測(cè)的方法,其實(shí)就是確定檢測(cè)過程的條件,最終得到科學(xué)準(zhǔn)確的、有理有據(jù)的數(shù)據(jù),分析出結(jié)果令人可信。
工欲善其事,必先利其器,設(shè)備和試劑的準(zhǔn)備是不可缺少的。其中,要測(cè)定的指標(biāo)一定需要有對(duì)照品,也就是參考標(biāo)準(zhǔn)。比如,精密稱量麥角甾醇對(duì)照品2.5mg,放置于5mL的容量瓶中,加入甲醇溶解并定容,制備成0.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。對(duì)樣品的處理,也是非常關(guān)鍵的。它是基礎(chǔ)性的,考驗(yàn)的是實(shí)驗(yàn)的基本功。如果樣品提取沒有準(zhǔn)確,測(cè)定過程有多精密,結(jié)果也未必真實(shí)。精確稱量5g植物樣品,加入石油醚,在60℃-90℃條件下索氏提取6h,提取液水浴蒸干,甲醇溶解,定容到5mL容量瓶中,就是樣品溶液了。
檢測(cè)數(shù)據(jù)怎么樣,就要看實(shí)驗(yàn)條件了。HPLC檢測(cè)采用常規(guī)的C18色譜柱,250mmx4.6mm,5um;流動(dòng)相為甲醇,柱溫25℃,檢測(cè)波長283nm,流速1.0ml/min,進(jìn)樣量為10uL。上機(jī)檢測(cè),測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的色譜峰。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度濃度進(jìn)樣,對(duì)檢測(cè)出來的色譜峰進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得回歸方程。如果是新的方法,需要考察精密度、重復(fù)性、回收率等。最終,計(jì)算出樣品中的麥角甾醇含量。