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鐵皮石斛具有悠久的歷史,是一味很好的中草藥。石斛里面有很多有效成分,比如生物堿、多糖、氨基酸、酚類等。每一類物質(zhì)成分都有對(duì)應(yīng)的功能,也是靠通力配合才能共同完成對(duì)應(yīng)的作用機(jī)制,比如酚類能抗衰老,多糖能增強(qiáng)免疫力等。石斛多糖具有清除自由基,提高抗氧化酶活性,抑制脂質(zhì)過(guò)氧化,保護(hù)生物膜等,具有較強(qiáng)的抗氧化能力?!渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中就有記載,具有“輕身延年”的作用。
檢測(cè)鐵皮石斛的方法有很多種,包括酚硫酸法,硫酸蒽酮法等。這些方法有一個(gè)共同的特點(diǎn),就是利用石斛中的多糖和特定試劑發(fā)生反應(yīng),通過(guò)顯色物產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和多糖的濃度是成線性的關(guān)系的,于是乎,就用分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度。吸光度值是可以讀取數(shù)據(jù)的,濃度是已知的,通過(guò)幾個(gè)點(diǎn)的測(cè)定就可以制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線了。這個(gè)曲線就像標(biāo)準(zhǔn)線譜一樣,依靠它,通過(guò)樣品的吸光度值,才能得到對(duì)應(yīng)的、理論上的樣品多糖濃度。
1.酚硫酸法
這是一種常見的檢測(cè)多糖含量的方法,當(dāng)溶液中有酚存在的時(shí)候,多糖能夠在濃硫酸的作用下產(chǎn)生藍(lán)色或紫色的反應(yīng)產(chǎn)物。準(zhǔn)備一個(gè)研缽,將鐵皮石斛研碎,并稱取備用。用0.1,0.2,0.4,0.6,0.8g/L的多糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別用酚和濃硫酸進(jìn)行處理。分別測(cè)定對(duì)應(yīng)濃度下的吸光度值,制作成標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣品也加入酚和濃硫酸,保持一段有效的反應(yīng)時(shí)間,并測(cè)定它的吸光度值,可以多測(cè)幾次求取平均值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中的多糖含量。
2.硫酸蒽酮比色法
石斛多糖在濃硫酸的作用下,會(huì)被水解成單糖分子,并迅速的脫水形成糠醛??啡┚陀幸馑剂耍軌蚝洼焱噭┌l(fā)生縮合反應(yīng),產(chǎn)生糠醛衍生物。這個(gè)糠醛衍生物是有顏色的,正常情況下是呈藍(lán)綠色的,而且能夠在一定時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定的?,F(xiàn)在做檢測(cè),如果溶液的顏色不穩(wěn)定,很容易測(cè)不準(zhǔn)的。顏色越穩(wěn)定,濃度就越均勻。如果顏色很快就變了,那測(cè)得的吸光度就和濃度之間的關(guān)系發(fā)生變化了。這個(gè)變化暫且說(shuō)是怎么樣的,但和理想的狀態(tài)下是有一點(diǎn)差別的。但是,這個(gè)差別是有很難發(fā)現(xiàn)的。
因此,在使用比色法檢測(cè)多糖濃度的時(shí)候,需要注意顏色的變化時(shí)間。有的是試劑盒的形式,說(shuō)明書上會(huì)標(biāo)出來(lái)注意事項(xiàng),在多少分鐘內(nèi)完成測(cè)定吸光度值。采用分光光度計(jì),在624nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。同樣,采用0.1,0.2,0.4,0.6,0.8g/L的多糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)定對(duì)應(yīng)吸光度值,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)樣品也進(jìn)行同樣的操作,并測(cè)定吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,是可以計(jì)算出樣品中多糖的濃度的。