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β-1,3葡聚糖酶活性的測定
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-05-31 | 695 次瀏覽 | 分享到:

植物體內(nèi)的葡聚糖是由多個葡萄糖殘基以β-1,3-糖苷鍵連接起來的多聚糖化合物,它是真菌細胞壁的主要組成部分。當植物處于逆境條件下或有病的時候,它的體內(nèi)就會產(chǎn)生大量的β-1,3-葡聚糖酶,將多聚糖水解成糊精或寡聚糖,從而導致細胞壁破裂,真菌細胞逐漸凋亡,在一定程度上抑制了真菌對植物的侵染能力。β-1,3-葡聚糖酶能夠作用于葡聚糖的β-1,3-糖苷鍵,產(chǎn)生還原性末端。因此,利用3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑測定生成還原糖的量,可以用來表示β-1,3-葡聚糖酶活性。



檢測酶活就要用到標準曲線,吸取1mg/ml的葡萄糖標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8ml,依次加入25ml的具塞刻度試管中,加入DNS顯色劑3ml,沸水浴5min,冷卻后加入蒸餾水20ml混勻,在分光光度計的520nm的波長處測定吸光度值。根據(jù)濃度和吸光度值之間的關系,制作處對應的標曲曲線。



有了標準曲線,就要測樣品了。測樣品的吸光度值,結合標準曲線就能計算出樣品中的酶活。那么,現(xiàn)在要做的就是對樣品進行處理。比如,稱取植物樣品,在研缽中,加入提取緩沖液,在冰浴的條件下研磨。然后在4℃,高速離心30min,收集上清液,在低溫的條件下進行保存?zhèn)溆谩?/span>



現(xiàn)在,要測酶活了。酶活就是測定酶的作用能力,我們可以用兩個反應試管,分別加入底物100ul0.4%的昆布多糖溶液。其中,向一支試管中加入100uL酶液,向另外一支試管中加入100ul煮沸5min后的酶液做對照。同時在37℃的條件下保溫40min,保溫后分別加入1.8ml的蒸餾水和1.5ml的DNS試劑,最后在沸水浴中加熱3min。再用蒸餾水將顯色的反應液稀釋至24mL,混勻?;旌弦涸诜止夤舛扔嫷?40nm的波長處測定吸光度值,可以多次幾次求取平均值。


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